- 更新時間2020-12-20
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許多有機化合物在紫外區(qū)具有特征的吸收光譜，因此可用
紫外分光光度計對有機物質(zhì)進行定性鑒定，結構分析及定量測定。紫外分光光度法定量測定的依據(jù)是比耳定律。首先確定化合物的紫外吸收光譜，確定大吸收波長。在選定的波長下，作出化合物溶液的工作曲線，根據(jù)在相同條件下測得待測液的吸光度值來確定待測液中化合物的含量。
物質(zhì)的吸收光譜本質(zhì)上就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長的光能量，相應地發(fā)生了分子振動能級躍遷和電子能級躍遷的結果。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結構，其吸收光能量的情況也就不會相同。因此每種物質(zhì)就有其*的、固定的吸收光譜曲線，可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的高低判別或測定該物質(zhì)的含量，這就是分光光度定性和定量分析的基礎。分光光度分析就是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分、結構和物質(zhì)間相互作用的有效手段。
紫外分光光度光度法的定量分析基礎是朗伯-比爾(Lambert-Beer)定律。即物質(zhì)在一定濃度的吸光度與它的吸收介質(zhì)的厚度呈正比。
紫外分光光度計的主要校正內(nèi)容介紹：
1.吸光度校正
校正吸光度常用一很純物質(zhì)一定濃度的溶液為標準，且此溶液的吸光度系數(shù)經(jīng)不同實驗室核對，為了使標準液吸光度不受測定波長的微移動而有改變，常選擇具有較平滑吸收高峰的物質(zhì)，同時要求溶液穩(wěn)定，且在相當?shù)牟ㄩL范圍內(nèi)吸收度的改變符合Lambert-Beer定律，常用硫酸銅、硫酸銨鈷和硝酸鈉或鉀的溶液。鉻酸鉀溶液是常用的標準溶液，此溶液在紫外區(qū)和可見區(qū)均適用。
2.波長或波數(shù)校正
可用具有窄吸收帶的溶液，濾光片或蒸氣來校正所需要的光波范圍。如果要求很高的精密度時，可用放電燈泡發(fā)射的射線來校正。有的光譜儀其上已裝有一個為校正用的燈。苯的蒸氣對校正一定范圍的波長亦很有用，可用一小滴苯放于1cm厚的吸收杯中，測其吸收波長，在遠紫外區(qū)可用氧氣的吸收帶進行校正。用各種稀土金屬的濾光片，可以很快地校正波長，但準確度不如上述方法高。常用含有鈥和釹、鐠離子的濾光片。
3.雜散光校正
小量的雜散光往往會引起較大的測量誤差，它的校正可用一個能*吸收某一波長單色光，且在其他波長吸收很弱的溶液。從這個溶液所表現(xiàn)的透光情況可推測雜散光的近似值。由雜散光帶來的偽吸收帶，亦可用Lambert-Beer定律來檢查，但用此定律檢查偽吸收帶誤差較大。由切斷范圍之外所表現(xiàn)的透射比可得出近似的雜散光百分數(shù)。若所含雜散光大于0.1%，應設法減低，或對測得的吸收光度進行校正。由雜散光引起的誤差與雜散輻射成正比，因此校正值很容易從化合物的近于正確的曲線計算而得。此外還可用一個適當?shù)臑V光片，該濾光片在測定波長范圍內(nèi)*透光，但吸收此范圍外的光波，由此來消除雜散光。
